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MAL-PEG-SA:马来酰亚胺-聚乙二醇-链霉亲和素的生物偶联技术

发布时间:2026年05月28日 11:17 | 浏览次数:14
MAL-PEG-SA 马来酰亚胺 链霉亲和素 生物素-链霉亲和素系统 巯基反应 免疫分析

 

MAL-PEG-SA(马来酰亚胺-聚乙二醇-链霉亲和素)是一种通过化学偶联制备的功能性生物共轭物,兼具靶向修饰与生物识别双重特性。其独特的分子设计一端为马来酰亚胺(MAL)基团,可特异性与含巯基(-SH)的生物分子发生硫醚键偶联;另一端为链霉亲和素(SA),可与生物素发生特异性高亲和力结合(Kd≈10⁻¹⁵ M),在免疫分析、细胞成像、靶向药物递送等领域具有不可替代的作用。

产品参数

参数项 规格信息
英文名称 Maleimide-PEG-Streptavidin
中文名称 马来酰亚胺-聚乙二醇-链霉亲和素
别称 SA-PEG-MAL
产品货号 JYY201010412
分子式 (OCH₂CH₂)n
PEG分子量 2000 / 3400 / 5000 Da(可选)
性状 白色至类白色粉末状固体
溶解性 DCM、DMF、DMSO、THF、水
纯度 ≥95%(HPLC测定)
推荐pH pH 6.5-7.5(最佳反应活性)
储存条件 -20°C以下,避光
保质期 1年

 

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一、分子结构与反应原理

MAL-PEG-SA的分子结构由三部分构成,各自发挥独特功能:

1.1 马来酰亚胺基团(MAL)

MAL基团具有巯基反应活性,可在pH 6.5-7.5条件下与含巯基(-SH)的生物分子(如抗体Fab段、肽段、寡核苷酸等)发生特异性硫醚键偶联,反应条件温和,收率高。

1.2 聚乙二醇(PEG)间隔链

PEG链段具有高度水溶性和生物相容性,能有效减少非特异性结合,提升复合物在生理环境中的血液循环稳定性,同时增加分子的柔性以减少空间位阻。

1.3 链霉亲和素(SA)

SA可与生物素(biotin)发生特异性、高亲和力结合(解离常数Kd≈10⁻¹⁵ M),是已知最强的非共价相互作用之一。这种结合高度稳定,在广泛的pH范围和温度条件下均能保持。

二、生物偶联应用方案

2.1 靶向分子修饰流程

  1. 巯基化处理:将目标分子(如抗体、蛋白)与巯基化试剂(如SPDP、TRAIL)反应引入-SH
  2. MAL-PEG-SA偶联:在pH 6.5-7.5条件下,将巯基化分子与MAL-PEG-SA混合反应
  3. 生物素化:向反应体系中加入荧光素或药物标记的生物素衍生物
  4. 纯化鉴定:通过SEC-HPLC或SDS-PAGE验证偶联效率

2.2 常见应用体系

应用领域 偶联策略 优势
免疫分析 抗体-SH + MAL-PEG-SA + Biotin-荧光素 信号放大,检测灵敏度提高
细胞成像 靶向分子 + MAL-PEG-SA + Biotin-荧光染料 高特异性标记,背景低
靶向递送 药物载体 + MAL-PEG-SA + Biotin-配体 精准靶向,生物素化简单

三、典型应用场景

  • 流式细胞术:通过生物素-链霉亲和素系统放大荧光信号,提高细胞表面标志物检测灵敏度
  • 免疫荧光染色:实现荧光染料的多重标记,用于多色流式或免疫组化
  • ELISA体系:作为检测二抗的桥梁,提升信号放大效果
  • 活细胞表面标记:利用生物素-链霉亲和素高亲和力实现稳定持久的细胞表面修饰
  • 药物递送系统:构建生物素化的纳米载体,通过SA实现精准靶向

储存条件

储存形态 推荐条件 注意事项
冻干粉 -20°C以下,避光干燥 密封保存,避免潮解
溶液 -20°C或更低,pH 6.5-7.5缓冲液 避免反复冻融,建议分装
保质期 密封状态下12个月

⚠️ 使用注意事项

  • MAL基团在酸性条件下(pH<5.5)可能发生水解,需控制反应pH
  • 链霉亲和素为蛋白类试剂,避免与变性剂或蛋白酶共存
  • 偶联反应建议在氮气保护下进行,避免氧化
  • 建议MAL:巯基摩尔比为1:1到1:5,根据实验优化

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❓ 常见问题解答(FAQ)

Q1:MAL-PEG-SA与抗体偶联时,抗体需要预处理吗?

A:是的。抗体通常需要先进行巯基化处理,常用方法包括:使用SPDP、2-IT等巯基化试剂在抗体表面引入-SH;或使用木瓜蛋白酶酶切获取含巯基的Fab片段。

Q2:生物素-链霉亲和素结合为何如此稳定?

A:生物素与链霉亲和素之间的结合是已知最强的非共价相互作用之一,Kd约为10⁻¹⁵ M。这种高亲和力源于多点结合和高度互补的结构匹配,使其在苛刻条件下(如高盐、变性剂)仍能保持稳定。

Q3:MAL基团水解会影响偶联效率吗?

A:是的。MAL基团在酸性条件下(pH<5.5)易发生水解,降低巯基反应活性。建议反应在pH 6.5-7.5条件下进行,并在反应后尽快纯化。

Q4:如何验证MAL-PEG-SA的偶联效率?

A:可通过ELISA或HABA法测定链霉亲和素活性保留率;通过SDS-PAGE或SEC-HPLC检测分子量变化;通过荧光标记的生物素检测结合能力。

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