DOPE 是一种对 pH 值敏感的磷脂，它可以在酸性 pH 值下使内体膜不稳定，并帮助脂质体将其内容物输送到细胞质中。因此，DOPE 与阳离子脂质的结合可能是观察到对巨噬细胞的毒性的原因。为了检验这个假设，我们用 DPPC 代替了 DOPE。DPPC 是一种对 pH 不敏感的磷脂，不会破坏内体膜的稳定性。在含有阳离子 DOTAP 的脂质体中，用 DPPC 代替 DOPE 不会改变ζ电位（DOPE/DOTAP：42.0±10.9 mV，DPPC/DOTAP：42.6±6.8 mV）。但是，DPPC逐渐取代DOPE显著降低了对巨噬细胞的毒性。用 DPPC 代替 DOPE 并没有完全消除毒性（正如添加 DPPE-PEG 2000所观察到的），但在所用浓度下毒性从未超过 15%。

阳离子脂质在与脂质体中使用的浓度相当的浓度下对巨噬细胞有毒性，而单独的 DOPE 没有毒性。

所有测试的阳离子脂质体对吞噬性巨噬细胞和单核细胞样 U937 细胞都有毒性，但对非吞噬性 T 淋巴细胞没有毒性。

阳离子脂质体中 pH 敏感性 DOPE 的存在似乎与阳离子脂质对巨噬细胞的毒性有关。我们发现，虽然所有测试的阳离子脂质在没有 DOPE 的情况下都是有毒的，但添加 DOPE 明显以协同方式增强了这种毒性。用 DPPC 代替 DOPE 降低了这种毒性。DOPE 可以通过破坏内体膜的稳定性（由于在酸性 pH 下形成倒六角相）来增强阳离子脂质的毒性，从而将阳离子脂质释放到细胞质中。

DPPC不具备这个特性。 非阳离子脂质体对吞噬细胞也有毒性，但程度低于阳离子脂质体。我们之前已经表明，由二棕榈酰磷脂酰胆碱 (DPPC)/二棕榈酰磷脂酰乙醇胺 (DPPE)、DPPC/二肉豆蔻酰磷脂酰甘油 (DMPG) 和 DPPC/磷脂酰丝氨酸 (PS) 磷脂（最终浓度为 0.5 μmol 磷脂/ml）组成的脂质体对巨噬细胞具有毒性，尽管最大任何脂质体制剂的毒性从未超过 15%。在本研究中，我们还表明，DPPC/DOTAP 脂质体的毒性与阴离子或中性脂质体观察到的毒性相当（<15%）。

由ζ电位测量的脂质体电荷不是解释这种毒性的重要因素。

DNA在阳离子脂质体中的掺入，在几种制剂中产生了负的ζ电位，并没有消除观察到的对巨噬细胞的毒性。

巨噬细胞可以内化含有蛋白质抗原的脂质体，例如用 DOPE 和棕榈酰同型半胱氨酸或DOPC和二油酰磷脂酰丝氨酸DOPS配制的脂质体，并将其内容物呈递给 T 淋巴细胞以启动免疫反应。添加 DPPE-PEG 2000阳离子脂质体阻断巨噬细胞和单核细胞样 U937 细胞对脂质体的内吞作用，消除了它们的毒性。这些结果强烈表明巨噬细胞的高吞噬活性是造成高度毒性的原因。