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冰合试剂科普┃CY5.5-PEG-MAL怎么用?解析近红外荧光聚乙二醇马来酰亚胺的标记机制与成像应用

发布时间:2026年05月15日 10:29 | 浏览次数:2

CY5.5-PEG-MAL是一种集荧光示踪与生物偶联功能于一体的近红外荧光聚合物。其分子结构由高荧光量子产率的Cyanine5.5(CY5.5)染料、亲水性的聚乙二醇(PEG)间隔臂以及末端的马来酰亚胺(Maleimide)活性基团组成。核心理化特性表现为:在675nm左右有强吸收,在700nm左右发射近红外光,具有良好的光稳定性和水溶性。PEG链的引入有效降低了染料的聚集猝灭效应,而马来酰亚胺基团则赋予其对巯基(-SH)的高度特异性亲和力,使其成为活体成像和生物标记的理想工具。

基础参数

• 英文名称Cyanine5.5-PEG-Maleimide

• 中文名称CY5.5-聚乙二醇-马来酰亚胺

• 性状:深绿色固体或粘稠液体(取决于PEG长度)。

• 纯度≥95%(HPLC)。

• 储运温度-20℃避光冷冻保存,运输需低温冰袋。

• 试剂厂家:冰合试剂

核心应用

1. 蛋白质与抗体的荧光标记
马来酰亚胺基团能特异性地与蛋白质(如抗体、酶)上的半胱氨酸残基的巯基发生迈克尔加成反应,形成稳定的硫醚键。利用此性质,可将CY5.5荧光基团高效、定点地标记在目标蛋白上,用于流式细胞术、免疫印迹或免疫荧光染色,避免了传统非特异性标记导致的背景干扰。

2. 多肽与核酸的偶联
在多肽药物或核酸适配体的研究中,常需要引入荧光探针以追踪其在细胞内的分布。CY5.5-PEG-MAL可通过其马来酰亚胺端与含有巯基的修饰多肽或硫代磷酸化核酸反应,PEG链的柔性间隔臂有助于减少荧光基团对生物大分子活性的位阻影响。

3. 活体成像与纳米探针构建
由于CY5.5的近红外发射波长能有效穿透生物组织且背景荧光低,该试剂常用于构建肿瘤靶向的纳米探针。通过将CY5.5-PEG-MAL修饰在脂质体、胶束或上转换纳米颗粒表面,可实时监测纳米载体在小动物体内的药代动力学、生物分布及靶向富集情况。

注意事项

• 避光操作CY5.5染料对光敏感,所有操作步骤应尽量避光,以防止荧光淬灭。

• pH控制:马来酰亚胺与巯基的反应通常在pH 6.5-7.5的缓冲液中进行,过高pH会导致水解副反应增加。

• 溶解性:该试剂易溶于水、DMSO和缓冲液。

常见FAQ

1. Q:CY5.5和CY5有什么区别?
A:CY5.5的激发/发射波长比CY5更长(红移),属于近红外区域,组织穿透力更强,背景干扰更小,更适合活体成像。

2. Q:标记后的产物如何纯化?
A:通常使用脱盐柱(如PD-10柱)或透析袋去除未反应的游离染料。

3. Q:为什么反应缓冲液中不能含有DTT或β-巯基乙醇?
A:这些还原剂含有游离巯基,会与马来酰亚胺竞争反应,消耗试剂,因此在偶联前需去除或置换缓冲液。

4. Q:PEG的长度会影响荧光强度吗?
A:PEG主要起空间位阻和增加水溶性的作用,适当长度的PEG可以减少染料自猝灭,从而提高检测灵敏度。

5. Q:能否用于细胞内标记?
A:该试剂主要用于体外预标记,若需细胞内标记,需考虑细胞膜通透性及探针的内化机制。

【特别提醒】以上为冰合试剂相关技术介绍,仅供科研参考。仅用于科研用途,严禁用于人体实验哦,大家一定要严格遵守科研规范,合规开展实验~

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