CY5.5-NHS 是一种用于将近红外荧光染料共价连接到生物分子上的胺反应性试剂。其核心结构由荧光发色团(Cy5.5菁染料骨架)和一个活化的羧酸酯(N-羟基琥珀酰亚胺酯,NHS酯)组成。NHS酯是一个优秀的离去基团,可与伯胺(-NH2,如赖氨酸残基或多肽N端)在温和的碱性条件下迅速反应,形成稳定的酰胺键。
关键性质:
长波近红外荧光:CY5.5-NHS 的激发峰约在675 nm,发射峰约在694 nm,处于组织“光学透明窗口”。该波段有效避开了血红蛋白和水的主吸收峰,可实现深层组织成像(深度可达数厘米)。
高反应性与选择性:NHS酯对胺基的反应速率远高于对水(水解)的速率,特别是在pH 8.0-8.5时。这允许在几分钟内完成蛋白质的高效标记,且副产物易于去除。
良好的水溶性:分子结构中含有磺酸基团(磺化Cy5.5),无需有机助溶剂即可在水相中直接进行标记反应,避免了大多数蛋白质在有机溶剂中的变性风险。
科研应用:
抗体和蛋白标记:制备近红外荧光探针,用于细胞表面标志物流式检测、蛋白质印迹(近红外通道)和免疫荧光。
多肽标记与纯化追踪:标记合成的靶向多肽,便于用荧光监测其纯化过程、细胞结合和内化。
纳米粒子功能化:通过与纳米粒子表面预先引入的胺基反应,赋予纳米粒子近红外成像能力。
使用要点:反应缓冲液必须不含Tris、甘氨酸或铵盐,它们会竞争反应。典型的标记条件:pH 8.0-8.5的碳酸氢钠或HEPES缓冲液,室温反应1小时。染料与蛋白的摩尔比建议在5:1到20:1之间。反应后,需通过脱盐柱纯化去除游离染料。产物需避光、-20°C储存。
【特别提醒】以上为冰合试剂相关技术介绍,仅供科研参考。本产品仅用于科研用途,严禁用于人体实验哦,大家一定要严格遵守科研规范,合规开展实验~